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目的:
建立贵州苗药“水金凤”药材四个来源及易混品准确、快速、高效的鉴别方法，拟订“水金风”药材科学、合理、可行质量评价方法，以保障“水金凤”临床用药的有效性和安全性，为指导“水金凤”的临床使用和开发利用提供技术指导和科学理论依据。
方法:
1.对“水金凤”药材四个来源原植物和同属易混品的植物叶片、花、果实和种子的外观形态进行观测;
2.通过光学显微镜对“水金凤”及其易混品的叶表皮、粉末、茎和叶横切面的组织构造进行观测;
3.按《中国药典》(2015版)四部0502项下薄层色谱法操作方法，对“水金凤”及其易混品进行薄层色谱鉴别研究;
4.采用高效液相色谱法(HPLC)对“水金凤”的色谱指纹图谱进行研究，并比较“水金风”四个来源及易混品种的HPLC指纹图谱差异性;
5.通过ITS、trnL、atpB.rbcL三个基因片段对“水金凤”及其同属植物进行种间鉴别，利用Sequencher4.2、Bio Eidt、Codon Code Aligner、muscle3.6、MEGA4.0等软件对三个序列PCR扩增产物进行分析、拼接、校对，计算并分析K2P遗传距离，构建Neighbor Joining(NJ)树;
6.建立“水金凤”总黄酮含量测定方法，采用星点-效应面法优化“水金凤”总黄酮的最佳提取工艺;
7.对“水金凤”药材进行性状、显微、薄层鉴别，测定并比较17批次“水金凤”药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总黄酮含量。
结果:
通过实验得到结果如下:
1.“水金凤”及其同属易混品的外观形态差异明显，通过叶缘形态将13种凤仙花属植物分为三类，即粗圆齿状类、粗锯齿状类和细锯齿状类;通过种子种皮表面纹理特征，将11种凤仙花分为四类:网状型、隆起型、颗粒型和光滑型;凤仙花花的颜色、大小、萼片、旗瓣、翼瓣、唇瓣的形态特征，种子的形状、大小、色泽和种皮表面纹理，种问差异明显，为凤仙花属植物的重要鉴别特征，可作“水金凤”及其易混品的鉴别方法;
2.“水金凤”的四个来源及其同属易混品的茎、叶横切面组织结构表明，凤仙花属植物茎皮层的厚度、厚角组织的层数、维管束的类型和数量存在差异，通过显微特征将l1种凤仙花分为栅栏组织发达型、较发达型和不发达型。叶肉栅栏组织的发达程度和主脉维管束的类型具种间差异，可作为“水金凤”及其同属易混品的鉴别特征;
3.建立了专属性较强、重现性高的“水金凤”薄层色谱鉴别的色谱条件;
4.建立了重现性高、稳定强的“水金凤”高效液相色谱指纹图谱色谱条件，并构建了指纹图谱;
5.凤仙花属12种73个样品，2条基因片段ITS、trnL长度分别为657bp～702bp、410bp～439bp;(G+C)含量分别为43.0％～48.8％、30.0％～34.1％;扩增成功率分别为100％、95％;测序成功率为90.2％、96.5％;73份atpB—rbcL片段扩增产物进行测序，仅获得7份质量较高，可用于分析的序列，测序成功率仅为9.5％，测序成功率过低，不推荐此片段作为“水金凤”及其易混品的分子鉴别序列;ITS序列长度为7ll，含311个保守位点，388个变异位点，310个信息位点，分别占总序列长度的44％、55％、43％:trnL序列长度为423bp，含185个保守位点，231个变异位点，102个信息位点，分别占总序列长度的38％、48％、21％;K2P遗传距离和NJ进化树结果显示，ITS和trnL序列对12种凤仙花具有较好的鉴别能力，能够将12种凤仙花属植物快速，准确的区分，鉴别准确率分别为96％和92％，能准确的区分“水金凤”药材的四个来源于其他易混品，推荐作为“水金凤”及其易混品DNA条形码分子鉴别序列;目前主要依据植物的生长形态、花色颜色、大小、其解剖形态作为主要的鉴别依据，这一点在以ITS和trnL序列建立的NJ进化树上有明显体现，也说明了目前主要以花的形态作为该属植物分类鉴定主要依据的合理性。
6.建立了“水金凤”药材总黄酮含量测定方法并优选得到提取率高、模型可靠、方法稳定的“水金凤”总黄酮最佳提取工艺;
7.完善和补充了《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003版)“水金凤”药材的质量评价项目，即性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，灰分、浸出物、总黄酮含量测定。
结论:
通过外观形态、显微鉴别、薄层鉴别、HPLC指纹图谱鉴别、分别方法能对“水金凤”及其易混品进行准确区分，获得了“水金凤”总黄酮含量测定方法和最佳提取工艺，建立了重现性、稳定性高的薄层色谱和高效液相色谱指纹图谱色谱条件。达到了对“水金凤”及其易混品准确鉴别、完善和补充“水金凤”药材的质量标准、提高了“水金凤”药材的质量评价水平的预期目标，为“水金凤”药材的临床用药和开发利用提供了基础资料和理论依据。
建立贵州苗药“水金凤”药材四个来源及易混品准确、快速、高效的鉴别方法，拟订“水金风”药材科学、合理、可行质量评价方法，以保障“水金凤”临床用药的有效性和安全性，为指导“水金凤”的临床使用和开发利用提供技术指导和科学理论依据。
方法:
1.对“水金凤”药材四个来源原植物和同属易混品的植物叶片、花、果实和种子的外观形态进行观测;
2.通过光学显微镜对“水金凤”及其易混品的叶表皮、粉末、茎和叶横切面的组织构造进行观测;
3.按《中国药典》(2015版)四部0502项下薄层色谱法操作方法，对“水金凤”及其易混品进行薄层色谱鉴别研究;
4.采用高效液相色谱法(HPLC)对“水金凤”的色谱指纹图谱进行研究，并比较“水金风”四个来源及易混品种的HPLC指纹图谱差异性;
5.通过ITS、trnL、atpB.rbcL三个基因片段对“水金凤”及其同属植物进行种间鉴别，利用Sequencher4.2、Bio Eidt、Codon Code Aligner、muscle3.6、MEGA4.0等软件对三个序列PCR扩增产物进行分析、拼接、校对，计算并分析K2P遗传距离，构建Neighbor Joining(NJ)树;
6.建立“水金凤”总黄酮含量测定方法，采用星点-效应面法优化“水金凤”总黄酮的最佳提取工艺;
7.对“水金凤”药材进行性状、显微、薄层鉴别，测定并比较17批次“水金凤”药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总黄酮含量。
结果:
通过实验得到结果如下:
1.“水金凤”及其同属易混品的外观形态差异明显，通过叶缘形态将13种凤仙花属植物分为三类，即粗圆齿状类、粗锯齿状类和细锯齿状类;通过种子种皮表面纹理特征，将11种凤仙花分为四类:网状型、隆起型、颗粒型和光滑型;凤仙花花的颜色、大小、萼片、旗瓣、翼瓣、唇瓣的形态特征，种子的形状、大小、色泽和种皮表面纹理，种问差异明显，为凤仙花属植物的重要鉴别特征，可作“水金凤”及其易混品的鉴别方法;
2.“水金凤”的四个来源及其同属易混品的茎、叶横切面组织结构表明，凤仙花属植物茎皮层的厚度、厚角组织的层数、维管束的类型和数量存在差异，通过显微特征将l1种凤仙花分为栅栏组织发达型、较发达型和不发达型。叶肉栅栏组织的发达程度和主脉维管束的类型具种间差异，可作为“水金凤”及其同属易混品的鉴别特征;
3.建立了专属性较强、重现性高的“水金凤”薄层色谱鉴别的色谱条件;
4.建立了重现性高、稳定强的“水金凤”高效液相色谱指纹图谱色谱条件，并构建了指纹图谱;
5.凤仙花属12种73个样品，2条基因片段ITS、trnL长度分别为657bp～702bp、410bp～439bp;(G+C)含量分别为43.0％～48.8％、30.0％～34.1％;扩增成功率分别为100％、95％;测序成功率为90.2％、96.5％;73份atpB—rbcL片段扩增产物进行测序，仅获得7份质量较高，可用于分析的序列，测序成功率仅为9.5％，测序成功率过低，不推荐此片段作为“水金凤”及其易混品的分子鉴别序列;ITS序列长度为7ll，含311个保守位点，388个变异位点，310个信息位点，分别占总序列长度的44％、55％、43％:trnL序列长度为423bp，含185个保守位点，231个变异位点，102个信息位点，分别占总序列长度的38％、48％、21％;K2P遗传距离和NJ进化树结果显示，ITS和trnL序列对12种凤仙花具有较好的鉴别能力，能够将12种凤仙花属植物快速，准确的区分，鉴别准确率分别为96％和92％，能准确的区分“水金凤”药材的四个来源于其他易混品，推荐作为“水金凤”及其易混品DNA条形码分子鉴别序列;目前主要依据植物的生长形态、花色颜色、大小、其解剖形态作为主要的鉴别依据，这一点在以ITS和trnL序列建立的NJ进化树上有明显体现，也说明了目前主要以花的形态作为该属植物分类鉴定主要依据的合理性。
6.建立了“水金凤”药材总黄酮含量测定方法并优选得到提取率高、模型可靠、方法稳定的“水金凤”总黄酮最佳提取工艺;
7.完善和补充了《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003版)“水金凤”药材的质量评价项目，即性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，灰分、浸出物、总黄酮含量测定。
结论:
通过外观形态、显微鉴别、薄层鉴别、HPLC指纹图谱鉴别、分别方法能对“水金凤”及其易混品进行准确区分，获得了“水金凤”总黄酮含量测定方法和最佳提取工艺，建立了重现性、稳定性高的薄层色谱和高效液相色谱指纹图谱色谱条件。达到了对“水金凤”及其易混品准确鉴别、完善和补充“水金凤”药材的质量标准、提高了“水金凤”药材的质量评价水平的预期目标，为“水金凤”药材的临床用药和开发利用提供了基础资料和理论依据。