精子蛋白vigilin在水稻瘤矮病毒垂直传播中的作用

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近年来,由水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病在我国海南、广东、福建等稻区发生流行,成为我国南方稻区的主要病毒病害之一,对水稻的农业生产造成严重威胁。RGDV属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus),主要由介体电光叶蝉以持久增殖型的方式进行传播。目前关于RGDV与介体昆虫互作的研究主要集中在侵染循回、病毒的复制与扩散过程等,本实验室前期通过GST pull-down技术从精子可溶性总蛋白中“钓取”了与RGDV P8蛋白相互作用的精子蛋白,包括高密度脂蛋白结合蛋白(vigilin)、钙黏蛋白(Calreticulin)、载脂蛋白前体(Lipophorin precursor)等九种候选互作蛋白。本研究利用酵母双杂交系统对上述九种蛋白进行进一步验证,通过酵母双杂交实验,我们发现只有vigilin可以与RGDV互作。为了明确vigilin蛋白在RGDV侵染电光叶蝉过程中的功能,本论文首先利用GST pull-down、免疫共沉淀实验证明电光叶蝉精子蛋白中的vigilin蛋白能与RGDV P8在体外发生特异性互作;其次通过RT-qPCR、western blot实验发现vigilin在雄虫精巢的表达量高于虫体的其他组织器官。当病毒侵染介体电光叶蝉时,病毒含量与vigilin的表达量呈现正相关的趋势。利用RNA干扰技术,体外合成vigilin双链(dsvigilin)抑制vigilin基因在介体叶蝉中的表达,发现当抑制vigilin在精巢表达时,无论在转录水平还是蛋白水平,RGDV在精巢的含量均会降低。因此,推测vigilin可能通过与病毒外壳蛋白的互作影响病毒的增殖,从而影响病毒在精巢中的增殖复制。综上所述,本研究证明RGDV P8蛋白与电光叶蝉雄虫精子vigilin蛋白存在互作关系,由于电光叶蝉雄虫可以通过交配将病毒传递给雌虫,并且也可以传递给子代昆虫,而vigilin在精巢中表达量比其他组织高,表明vigilin有利于促进病毒经精子传播。本研究为深入研究RGDV通过雄虫垂直传播提供了理论支持。
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