僵蚕抑癌活性成分追踪及其诱导Mcf-7凋亡途径的研究

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僵蚕(Bombyx batryticatus)是一种重要的药用资源昆虫,被广泛应用于中医治疗中。本论文通过对僵蚕醇提物不同重萃相的活性分析,及其诱导人乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡途径研究来探讨僵蚕中抗癌活性成分及作用机理。研究取得如下主要结果:高分辨质谱分析结果表明,僵蚕醇提物主要含有蛋白质、氨基酸、酯类、糖类、黄酮类、核苷、有机酸、维生素和萜烯类等物质。而僵蚕醇提物石油醚重萃相主要包括有机酸、核苷和氨基酸。在僵蚕醇提物萃取相中,僵蚕醇提物石油醚重萃相可以明显抑制MCF-7细胞增殖,并且在一定程度上促进正常细胞BHK-21增殖。僵蚕醇提物乙酸乙酯相轻微抑制MCF-7细胞增殖和促进BHK-21细胞增殖。石油醚重萃相对MCF-7细胞活力的抑制力以及对BHK-21细胞的促进增殖作用具有时间和浓度的依赖性。石油醚重萃相分别处理BHK-21和MCF-7细胞后,随着处理时间的增加,MCF-7细胞形态发生明显变化,出现细胞数量减少并且伴随皱缩、变形、破裂等现象。石油醚重萃相可诱导MCF-7细胞凋亡,并且凋亡率与僵蚕醇提物石油醚重萃相浓度呈正相关,僵蚕醇提物石油醚重萃相浓度为1.5 mg/mL时,细胞总凋亡率为19.42%,显著高于对照组。石油醚重萃相将MCF-7细胞周期阻滞在G1期和G2期,且阻滞程度与浓度呈正相关;僵蚕醇提物石油醚重萃相浓度为0.5 mg/mL、1.0 mg/mL时,G1期与G2期之和分别为68.58%和80.69%,均显著高于对照。石油醚重萃相能够影响MCF-7细胞Bax、Bcl-2和P21基因表达,无论在mRNA水平、还是蛋白质表达水平,僵蚕醇提物石油醚重萃相的浓度与Bax和P21呈正相关,与Bax/Bcl-2呈正相关;而与Bcl-2呈负相关。说明其诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的途径是通过上调Bax、P21、下调Bcl-2、增加Bax/Bcl-2比值来实现的。
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