论文部分内容阅读
重症肌无力(MG)系累及神经肌肉接头乙酰胆碱受体(AchR)的自身免疫性疾病。尽管目前已经明确参与MG自身免疫反应的抗体与靶抗原,但是MG自身免疫反应的产生机制仍不清楚。多项研究表明,胸腺异常与MG关系密切,可能为自身免疫产生的主要原因。胸腺来源的CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)对活化的效应T淋巴细胞具有显著的抑制功能,在维持自身免疫耐受中起着重要作用。Foxp3为抑制性转录调节基因,系Treg发育及功能形成所必须的重要条件。MG患者胸腺及外周血中存在CD4+CD25+Treg功能异常,但Foxp3作为Treg功能特征性标志,目前对其在MG胸腺内表达及变化的研究尚未见报道。本研究结合HE染色与免疫组织化学,检测Foxp3在MG患者胸腺组织中的表达与定位分布;采用Western Blot与RT-PCR技术观察Foxp3基因及蛋白产物表达的变化;并利用流式细胞技术分析Foxp3阳性细胞(Foxp3+)在胸腺细胞亚群中的分布与变化,以及功能分子CTLA-4、TGF-β、IL-10的表达;通过RT-PCR与Western Blot分别检测MG胸腺TGF-β、IFN-γ、IL-10、IL-4 mRNA以及Smad3、Smad7的表达并探讨其与Foxp3表达的关系。实验的主要结果:(1) MG增生胸腺、萎缩胸腺以及瘤旁胸腺的髓质区组织学改变较为相似,均表现为相对面积扩大,淋巴细胞数量增多;髓质区内淋巴滤泡形成,血管周围间隙增宽。增生胸腺及瘤旁胸腺CD25阳性细胞率显著高于对照。MG增生胸腺以及萎缩、瘤旁胸腺组织中Foxp3蛋白及mRNA水平无显著差异,但均显著低于正常胸腺而高于胸腺瘤。Foxp3蛋白与mRNA表达在不同的MGFA分型之间亦存在显著差异。(2)胸腺瘤组织以增生上皮细胞为主,间有数量不等淋巴细胞,其中CD25、Foxp3阳性细胞率,Foxp3蛋白及mRNA表达水平均显著低于对照胸腺、增生胸腺、萎缩胸腺及瘤旁胸腺。(3) Foxp3在CD4、CD8单阳性(SP)胸腺细胞以及CD4+CD8+双阳性(DP)胸腺细胞中均有表达,CD4+SP胸腺细胞中Foxp3+细胞比例非常显著高于CD8+SP、DP胸腺细胞(P＜0.01)。MG胸腺Foxp3+细胞在CD4+SP中的比例显著低于正常胸腺(P＜0.01),而在CD8+SP、DP中无显著改变。(4)正常胸腺CD25+细胞76%表达Foxp3,CD25-细胞0.32%表达Foxp3,差异非常显著(P＜0.01)。MG胸腺中Foxp3在CD25+细胞中的表达显著低于正常(P＜0.05),而CD25-细胞中Foxp3表达则非常显著高于正常(P＜0.01)。(5) MG胸腺组织Foxp3+细胞表达CTLA-4显著低于正常胸腺(P＜0.05),而TGF-β、IL-10的表达则无统计学差异。(6) MG胸腺组织中TGF-βmRNA表达水平、Smad3/Smad7比值均非常显著低于正常胸腺(P＜0.01)。其中,增生胸腺TGF-βmRNA水平非常显著高于胸腺瘤组织(P＜0.05)。(7) MG增生胸腺、萎缩胸腺、瘤旁胸腺及胸腺瘤组织中IFN-γmRNA表达存在显著性差异,增生胸腺IFN-γmRNA表达水平非常显著高于正常胸腺、萎缩胸腺、瘤旁胸腺以及胸腺瘤;萎缩胸腺、瘤旁胸腺中IFN-γmRNA水平亦显著高于胸腺瘤组织。(7) MG胸腺组织中Foxp3 mRNA表达水平与TGF-βmRNA呈正相关,与IFN-γmRNA表达呈负相关,与IL-10、IL-4 mRNA表达水平无显著相关性。。研究结论:①MG萎缩胸腺、瘤旁胸腺与增生胸腺具有相似的髓质区组织学改变及与之相一致的CD25+、Foxp3+细胞分布特点;且三者Foxp3蛋白、mRNA表达水平无显著差异。提示增生胸腺、萎缩胸腺、瘤旁胸腺具有相同的免疫病理学异常,这可能是MG发病的共同基础。胸腺瘤的存在是否参与MG发病及其作用尚需深入研究。②MG胸腺组织中Foxp3阳性细胞率、蛋白及mRNA表达水平均显著低于正常胸腺,且与MGFA临床分型相关;CD4+SP胸腺细胞、CD25+胸腺细胞表达Foxp3显著降低,提示Foxp3表达异常可能在MG发病中起着重要作用。③MG胸腺Foxp3+性细胞表达CTLA-4水平显著低于正常胸腺,而TGF-β、IL-10表达则无显著改变,表明CTLA-4/B7介导的细胞接触抑制途径异常,可能系MG胸腺Treg功能降低的原因之一。④MG胸腺内TGF-βmRNA水平,以及Smad3/Smad7比值显著低于正常,并与Foxp3表达显著正相关,提示TGF水平的降低可能系MG胸腺Foxp3表达下降的原因之一。而IFN-γ表达水平上调,并与Foxp3、TGF-β呈显著负相关,可能参与MG发病。