HPCE在分离测定葛根、苦玄参中有效成分的应用研究

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目的:本文第一部分旨在研究基于二元环糊精体系的毛细管电泳分离体系对葛根中3’-OCH3葛根素,葛根素,3’-OH葛根素,芒柄花苷,大豆苷,大豆苷元,染料木苷等七种异黄酮分离的影响,建立一种快速、灵敏、有效的分离分析七种异黄酮的毛细管电泳方法,为葛根药材及相关制剂中七种异黄酮的分析提供方法依据。本文第二部分研究以有机溶剂改良的胶束电动毛细管电泳法对苦玄参中四种有效成分(苦玄参苷IA、苦玄参苷IB、苦玄参苷IV和阿克苷)分离的影响,建立一种快速、实用的毛细管电泳新方法,为苦玄参药材及其制剂的质量控制提供依据。方法:采用BECKMAN毛细管电泳仪,连接二极管阵列检测器,未涂层毛细管柱(40.2cm×75μm id,有效长度30 cm)。(1)研究了影响七种异黄酮分离的因素:缓冲溶液的浓度和pH、磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)和α-环糊精(α-CD)的浓度、分离电压等,得到同时分离测定七种异黄酮的最优条件为:含30 mMα-环糊精(α-CD)和9.0 mM磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)的35 mM四硼酸钠溶液(pH 9.34)为运行缓冲溶液,分离电压为15 kV;0.5 psi的压力下进样5 s;(2)研究了缓冲溶液的浓度和pH、胆酸钠(SC)的浓度,甲醇和异丙醇的含量以及分离电压对苦玄参中四种有效成分分离的影响,得到同时分离和定量测定苦玄参苷IA、苦玄参苷IB、苦玄参苷IV和阿克苷的最优电泳条件为:含40 mM SC,10%(v/v)的甲醇和10%(v/v)的异丙醇的硼砂缓冲溶液(20 mM、pH 9.76),运行电压为18 kV,温度为25℃。进样条件:0.5 psi,5 s。结果:在最佳实验条件下,3’-OCH3葛根素,葛根素,3’-OH葛根素,染料木苷,芒柄花苷,大豆苷,大豆苷元可在11 min内达到基线分离;七种异黄酮的线性关系良好,相关系数在0.9978-0.9992;日内精密度为0.7-2.0%,日间精密度为0.8-1.9%;实际样品的回收率在97.7-103.1%之间。在最佳实验条件下,苦玄参中四种有效成分在14 min内分析物实现基线分离;四种分析物的线性关系良好,校准曲线的相关系数为0.9984-0.9995;四种分析物的日内精密度1.2-2.4%,日间精密度1.4-4.6%;分析物在实际样品的回收率在98.0-102.5%之间。结论:本文建立了基于二元环糊精体系的毛细管电泳法实现了七种异黄酮(3’-OCH3葛根素,葛根素,3’-OH葛根素,染料木苷,芒柄花苷,大豆苷,大豆苷元)在实际样品中的分离与测定。所建立的分析方法操作简便,为葛根药材及其制剂的质量控制提供了一种新方法。本文建立了简单、高效的有机溶剂改性的胶束电动毛细管电泳法,对苦玄参中的四种有效成分进行了分离测定,并成功用于苦玄参药材及其制剂中四种有效成分的含量测定。该法为苦玄参药材及其制剂的质量控制提供了科学依据与参考。
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