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背景与目的：1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)作为一种信号鞘磷脂，绝大多数与高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)结合，并介导HDL诸多生物功能如抗动脉粥样硬化、抗血栓和保护血管内皮等。S1P通过其5个受体(S1PR1~S1PR5)激活细胞内复杂的信号转导通路实现生物功能多样化。其中S1PR1/3在细胞增殖、血管发生和重建、神经形成、免疫细胞迁移、炎症反应、内皮细胞屏障功能等方面发挥重要作用，但有关S1PR1/3对巨噬细胞内胆固醇代谢的影响未见报道。因此，本论文主要探讨S1P通过S1PR1/3对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的调控作用及其信号机制，为全面了解S1P的抗动脉粥样硬化机制提供新的理论基础。方法：1.佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)诱导THP-1单核细胞24h后，选择不同时间和浓度的S1P进行处理，人胆固醇Elisa试剂盒检测细胞培养液中胆固醇含量。2.分别用VPC23019(S1PR1/3抑制剂，10μM)和JTE-013(S1PR2抑制剂，10μM)孵育THP-1源性巨噬细胞12h，然后加BODIPY-Cholesterol孵育过夜，激光共聚焦显微镜下观察胆固醇分布、定位和含量变化，同时用油红O染色显示细胞内脂质蓄积情况。3. VPC23019(10μM)处理THP-1源性巨噬细胞4h后，WesternBlot检测PI3K-Akt信号通路及NF-κB(P65)的蛋白活性，VPC23019(10μM)处理THP-1源性巨噬细胞24h后，Western Blot检测LXR及其下游基因ABCA1和ABCG1蛋白表达水平。4.分别以LY-294002和MK2206阻断P13K-Akt信号通路后，采用Western Blot检测ABCA1的蛋白表达水平，RT-PCR检测ABCA1和ABCG1的mRNA表达水平，BODIPY-Cholesterol荧光探针结合荧光显微镜，观察THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量，荧光分光光度计检测培养液中胆固醇浓度和胆固醇外流情况。结果：1.1μM S1P处理THP-1源性巨噬细胞24h，培养液中胆固醇含量达到最高。2. THP-1源性巨噬细胞胆固醇大部分选择性定位于细胞胞膜上，S1P可降低THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量。3.与对照组相比，S1PR1/3抑制剂VPC23019下调THP-1源性巨噬细胞PI3K-Akt信号通路活性，并增加NF-κB (P65)蛋白活性，降低LXR、ABCA1和ABCG1的蛋白表达水平。4.分别用S1PR1/3抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂阻断S1PR1/3-PI3K-Akt信号通路后，ABCA1和ABCG1的蛋白及mRNA表达水平下降，THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量增加，胆固醇外流减少。结论:1.S1P促进THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出。2.S1PR1/3-PI3K-Akt信号转导通路参与S1P对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的调控作用。