木瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化

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[目的]获得最佳的木瓜ISSR-PCR扩增反应体系。[方法]采用单因素试验和正交实验对木瓜ISSR-PCR反应体系的DNA模板浓度、引物浓度、延伸时间、循环次数等因素进行梯度优化。[结果]得到了木瓜ISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为引物浓度0.5μmol/L,DNA模板50 ng, Mix 10μL,ddH2O补全;最佳扩增程序为:94℃预变性5 min; 94℃变性45 s,退火45 s, 72℃延伸90 s, 35个循环;72℃延伸7 min, 4℃保存。[结论]优化确定的木瓜ISSR-PCR反应体系稳定可靠,为后续木瓜种质资源及遗传多样性研究奠定基础。
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