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摘要 研究怀地黄组织培养与快繁技术。以怀地黄茎尖部分为外植体，在以MS作为基本培养基的基础上，添加不同浓度的NAA、IAA、2，4-D、6-BA，配制不同浓度的培养基，对怀地黄的茎尖进行分化与诱导、继代与增殖及生根培养试验，并对试管苗进行炼苗移栽。获得了怀地黄茎尖培养脱毒与诱导、增殖和生根的培养基，以及生长所需要的外部条件和配套技术。
关键词 怀地黄；组织培养；快繁；培养基
中图分类号 S656.23 9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0104-01
Study on Tissue Culture and Rapid Propagation Technology of Rehmannia Glutinosa Libosch
DING Fang HOU Qian-qian LIU Guang-qing SUN Xi-yun SUN Feng-ling
（Shangqiu Academy of Agriculture and Forestry in Henan Province，Shangqiu Henan 476000）
Abstract The paper aimed to study thevirus-free tissue culture and the rapid propagation technology.With Rehmannia glutinosa Libosch shoot tip as explants，MS was used as the basic medium with different concentration of NAA，IAA，2，4-D and 6-BA to configure different media，the tests of differentiation and induction，subculture and proliferation as well as rooting culture on Rehmannia glutinosa Libosch were carried out and the test-tube plantlets were hardened and transplanted.In the experiment，the media of detoxification and induction，proliferation and rooting were obtained as well as the external environmental conditions for the plant growth and the matching technology.
Key words Rehmannia glutinosa Libosch；tissue culture；rapid propagation；culture medium
地黄为玄参科多年生草本植物，具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖等功效，影响内分泌系统、心脑血管系统、中枢神经系统、造血系统等的活性，有助于调节免疫功能。地黄在我国分布广泛，可见于山西、河南、陕西、内蒙古、山东、安徽、河北、四川等地，以河南的温县、孟县、博爱为地黄的道地产区。主要为大田栽培。
怀庆地黄是指产于古怀庆府的地黄，是著名的“四大怀药”之一[1]。针对目前地黄病毒病尚无安全有效药物进行治疗的现状，通过植物茎尖脱毒技术，利用植物营养体进行快速繁殖，以保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。
1 材料选择
选择正在生长的怀地黄的茎尖。
2 培养条件
地黄的组织培养与快速繁殖以MS为基本培养基，在此基础上添加萘乙酸（NAA）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚丁酸（IBA）、吲哚乙酸（IAA）。其中，①诱导与分化培养基：MS 0.3 mg/L 6-BA 0.02 mg/L NAA 0.1 mg/L GA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂；②继代与增殖培养基：MS 0.3 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂；③生根培养基：1/2 MS 0.05 mg/L IAA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂。以上培养基的pH值为5.6～5.8，均分装于培养瓶中，封口后，高压灭菌20 min，待用。培养条件：温度（26±2） ℃，湿度65%～70%，光照强度为2 000～2 500 lx，光照时间12～14 h/d。
3 无菌材料的获得和培养
从正在生长的植株中，选择无病虫、健壮、长势强、具有品种特征、长2～3 cm的茎尖部，去掉可见叶，用10%洗洁精溶液浸泡8～10 min后，再用流动自来水冲洗20～30 min，吸干水分。在无菌室内，于超净工作台上用75%酒精溶液处理20～30 s，再用0.1%升汞溶液灭菌8～10 min后，用无菌水冲洗4～5次，然后剪成0.5～1.0 cm长，含有1～2个腋芽的茎段，快速接种到诱导与分化培养基中诱导腋芽萌发。
分化与增殖培养：接种到诱导与分化培养基中的生长点，1周后有芽萌动，30～40 d芽长到3～4 cm高时，即可将芽切下转入继代与增殖培养基中进行增殖培养，10～15 d后有丛芽长出，继代周期25～28 d，1年可快繁8～11次，芽增殖倍数3～6倍。
4 壮苗与生根培养
选取生长健壮、长势好的芽苗转入生根培养基中培养，经过25 d培养的小苗生长健壮[4]，该培养基7～10 d有根原基形成，10～15 d有根形成，25～35 d可形成3～5条2～4 cm的根。
5 试管苗的移栽
将培养了30 d左右大量生根且长势良好的怀地黄组培苗打开培养瓶炼苗5 d，炼苗时首先要打开瓶口[5]，增加昼夜温差，使植株快速适应自然环境，提高试管苗的成活率。移栽前要洗净苗基部的培养基，以防污染。培养基质为腐殖质与珍珠岩（已灭菌，比例为1∶1）的混合基质，移栽后加塑料罩保水，15 d后去掉，前5～7 d适当遮荫，并保持湿度在85%～90%，以后湿度降至约65%，定期喷洒多菌灵2～3次，成活率超过93%[6-8]。
6 参考文献
[1] 路淑霞，涂荣涛，周春娥，等.怀地黄85-5叶片愈伤组织快速诱导和植株再生的研究[J].河南师范大学学报，2007（11）：148-149.
[2] 邵春月，高山林，陈锋，等.怀地黄分生组织培养脱病毒及快速繁殖技术的研究[J].药物生物技术，2008（15）：258-261.
[3] 薛建平，张爱民，李明军，等.怀地黄茎尖培养和植株再生技术的研究[J].新乡医学院学报，2000（17）：20-21.
[4] 王红娟，白自伟.怀地黄组织快繁[J].农家参谋，2002（12）：41.
[5] 丁亚君.怀地黄栽培技术[J].中国农业信息，2006（6）：33.
[6] 白自伟，王红娟.怀地黄组织快繁[J].河南农业，2002（11）：12.
[7] 邢军.怀地黄栽培技术[J].农业知识：致富与农资，2009（12）：7.
[8] 李明军，张晓丽，杜琳，等.怀地黄试管苗脱毒技术研究[J].河南师范大学学报：自然科学版，2008，36（2）：103-106.
关键词 怀地黄；组织培养；快繁；培养基
中图分类号 S656.23 9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0104-01
Study on Tissue Culture and Rapid Propagation Technology of Rehmannia Glutinosa Libosch
DING Fang HOU Qian-qian LIU Guang-qing SUN Xi-yun SUN Feng-ling
（Shangqiu Academy of Agriculture and Forestry in Henan Province，Shangqiu Henan 476000）
Abstract The paper aimed to study thevirus-free tissue culture and the rapid propagation technology.With Rehmannia glutinosa Libosch shoot tip as explants，MS was used as the basic medium with different concentration of NAA，IAA，2，4-D and 6-BA to configure different media，the tests of differentiation and induction，subculture and proliferation as well as rooting culture on Rehmannia glutinosa Libosch were carried out and the test-tube plantlets were hardened and transplanted.In the experiment，the media of detoxification and induction，proliferation and rooting were obtained as well as the external environmental conditions for the plant growth and the matching technology.
Key words Rehmannia glutinosa Libosch；tissue culture；rapid propagation；culture medium
地黄为玄参科多年生草本植物，具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖等功效，影响内分泌系统、心脑血管系统、中枢神经系统、造血系统等的活性，有助于调节免疫功能。地黄在我国分布广泛，可见于山西、河南、陕西、内蒙古、山东、安徽、河北、四川等地，以河南的温县、孟县、博爱为地黄的道地产区。主要为大田栽培。
怀庆地黄是指产于古怀庆府的地黄，是著名的“四大怀药”之一[1]。针对目前地黄病毒病尚无安全有效药物进行治疗的现状，通过植物茎尖脱毒技术，利用植物营养体进行快速繁殖，以保持原品种全部的遗传性，实现该品种种质的一致性。
1 材料选择
选择正在生长的怀地黄的茎尖。
2 培养条件
地黄的组织培养与快速繁殖以MS为基本培养基，在此基础上添加萘乙酸（NAA）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚丁酸（IBA）、吲哚乙酸（IAA）。其中，①诱导与分化培养基：MS 0.3 mg/L 6-BA 0.02 mg/L NAA 0.1 mg/L GA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂；②继代与增殖培养基：MS 0.3 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂；③生根培养基：1/2 MS 0.05 mg/L IAA 30 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂。以上培养基的pH值为5.6～5.8，均分装于培养瓶中，封口后，高压灭菌20 min，待用。培养条件：温度（26±2） ℃，湿度65%～70%，光照强度为2 000～2 500 lx，光照时间12～14 h/d。
3 无菌材料的获得和培养
从正在生长的植株中，选择无病虫、健壮、长势强、具有品种特征、长2～3 cm的茎尖部，去掉可见叶，用10%洗洁精溶液浸泡8～10 min后，再用流动自来水冲洗20～30 min，吸干水分。在无菌室内，于超净工作台上用75%酒精溶液处理20～30 s，再用0.1%升汞溶液灭菌8～10 min后，用无菌水冲洗4～5次，然后剪成0.5～1.0 cm长，含有1～2个腋芽的茎段，快速接种到诱导与分化培养基中诱导腋芽萌发。
分化与增殖培养：接种到诱导与分化培养基中的生长点，1周后有芽萌动，30～40 d芽长到3～4 cm高时，即可将芽切下转入继代与增殖培养基中进行增殖培养，10～15 d后有丛芽长出，继代周期25～28 d，1年可快繁8～11次，芽增殖倍数3～6倍。
4 壮苗与生根培养
选取生长健壮、长势好的芽苗转入生根培养基中培养，经过25 d培养的小苗生长健壮[4]，该培养基7～10 d有根原基形成，10～15 d有根形成，25～35 d可形成3～5条2～4 cm的根。
5 试管苗的移栽
将培养了30 d左右大量生根且长势良好的怀地黄组培苗打开培养瓶炼苗5 d，炼苗时首先要打开瓶口[5]，增加昼夜温差，使植株快速适应自然环境，提高试管苗的成活率。移栽前要洗净苗基部的培养基，以防污染。培养基质为腐殖质与珍珠岩（已灭菌，比例为1∶1）的混合基质，移栽后加塑料罩保水，15 d后去掉，前5～7 d适当遮荫，并保持湿度在85%～90%，以后湿度降至约65%，定期喷洒多菌灵2～3次，成活率超过93%[6-8]。
6 参考文献
[1] 路淑霞，涂荣涛，周春娥，等.怀地黄85-5叶片愈伤组织快速诱导和植株再生的研究[J].河南师范大学学报，2007（11）：148-149.
[2] 邵春月，高山林，陈锋，等.怀地黄分生组织培养脱病毒及快速繁殖技术的研究[J].药物生物技术，2008（15）：258-261.
[3] 薛建平，张爱民，李明军，等.怀地黄茎尖培养和植株再生技术的研究[J].新乡医学院学报，2000（17）：20-21.
[4] 王红娟，白自伟.怀地黄组织快繁[J].农家参谋，2002（12）：41.
[5] 丁亚君.怀地黄栽培技术[J].中国农业信息，2006（6）：33.
[6] 白自伟，王红娟.怀地黄组织快繁[J].河南农业，2002（11）：12.
[7] 邢军.怀地黄栽培技术[J].农业知识：致富与农资，2009（12）：7.
[8] 李明军，张晓丽，杜琳，等.怀地黄试管苗脱毒技术研究[J].河南师范大学学报：自然科学版，2008，36（2）：103-106.