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选择15头健康奶牛与15头酮病奶牛,采集血液与脂肪组织.检测两组奶牛血清中非酯化脂肪酸(nonestester-ified fatty acid,NEFA)、β-羟基丁酸(BHBA)、葡萄糖(glucose)含量.利用Western blot检测脂肪组织中脂解酶HSL的磷酸化水平以及ATGL蛋白表达,胰岛素信号通路关键分子IR和Akt的磷酸化水平;利用qRT-PCR检测脂肪组织中TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平.随后从1日龄健康荷斯坦奶牛腹膜网膜和肠系膜脂肪组织分离培养原代脂肪细胞,在分化成熟的脂肪细胞中添加0、0.1、1.0、10.0 μg/L的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)处理3 h,检测IR和Akt的磷酸化水平以及培养基上清中甘油(GC)含量.结果显示,与健康奶牛相比,酮病奶牛脂肪组织HSL磷酸化水平增加、ATGL蛋白表达量增加、IR和Akt的磷酸化水平降低,炎性因子TNF-α和IL-1β mRNA表达水平明显升高.此外,体外添加TNF-α显著增加HSL的磷酸化水平、ATGL的蛋白表达和培养基上清中GC含量,显著抑制IR和Akt的磷酸化水平.结果表明,TNF-α导致酮病奶牛脂肪组织脂解加剧并降低胰岛素敏感性.