【摘 要】
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将优化后的来自嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因在毕赤酵母中进行异源表达并分析了其表达产物的酶学性质。对来源于嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因催化域进行密码子优化,人工合成优化后
【机 构】
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食品科学与技术国家重点实验室江南大学; 江南大学无锡医学院; 南京百合贝可生物科技有限公司;
【基金项目】
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国家863计划项目(2012AA022207C);江苏省产学研联合创新基金——前瞻性联合研究项目(BY2014023-16);国家自然科学基金项目(31071595,20576046);张家港市科技支撑计划项目(ZKN1301);江苏省科技支撑计划项目(BE2012310,BE2011380);苏州市科技支撑计划项目(SNG201401)
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将优化后的来自嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因在毕赤酵母中进行异源表达并分析了其表达产物的酶学性质。对来源于嗜热裂孢菌的木聚糖酶基因催化域进行密码子优化,人工合成优化后的木聚糖酶成熟肽基因xyl11M,构建重组表达质粒pPIC9K-xyl11M,将其经SalⅠ线性化后电击转化毕赤酵母GS115,经G418筛选得到重组工程菌GS115/xyl11M,甲醇诱导表达重组蛋白。表达的重组蛋白reXyl11M经SDS-PAGE分析,其相对分子质量约34 000,酶活性可达到105.3 U/m L,最适反应温度为70℃,并在3075℃温度内较稳定;最适反应pH为6.0,在pH6.57.5范围内稳定;Co2+、Ba2+、Cu2+、Li+对酶活性有强烈的激活作用,Fe3+有明显的抑制作用,其它金属离子及EDTA对re Xyl11M酶活性影响不大。结果表明xyl11M成功在毕赤酵母GS115中实现表达,且reXyl11M的酶学特性优良。
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