【摘 要】
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本研究旨在获得产气荚膜梭菌α毒素（CPA）C末端（第247-370位氨基酸,CPAC）三拷贝串联融合蛋白,并评价其免疫原性。对已知的A型产气荚膜梭菌CPAC编码基因（GenBank登录号:AY823400.1）进
【基金项目】
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科技部“十三五”“牛羊重要疫病免疫防控新技术研究”重点专项子课题(2017WFD0500903);中国兽医药品监察所所级课题(201702)
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本研究旨在获得产气荚膜梭菌α毒素（CPA）C末端（第247-370位氨基酸,CPAC）三拷贝串联融合蛋白,并评价其免疫原性。对已知的A型产气荚膜梭菌CPAC编码基因（GenBank登录号:AY823400.1）进行优化设计,以同向串连的方式串联成三拷贝基因(GCPAC3),片段之间用柔性氨基酸linker（GGGS）连接,经人工合成后克隆至原核表达载体pET-30a（+）中进行表达与纯化,获得CPAC的三拷贝重组蛋白(rCPAC3)。利用Western blotting方法检测rCPAC3与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性。将rCPAC3与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。在二免21d后,对家兔经耳缘静脉注射1个家兔最低致死剂量（MLD）的A型产气荚膜梭菌毒素,检测rCPAC3对家兔的免疫保护效果。结果显示,rCPAC3主要以包涵体的形式表达,且能与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;每毫升的一免抗血清可中和30～50个、二免抗血清可中和70～100个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素。采用1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100%（4/4）死亡,免疫组得到了100%（4/4）的保护。以上结果说明,rCPAC3具有良好的免疫原性,为A型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的试验数据。
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