【摘 要】
：
重组转移载体pBSKA通过电转化导入亲本菌传染性胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌(APP-7)WF83株，电转化后的产物涂布于TSB/Kan平板，1-2d可获得突变株。卡那霉素抗性试验证实突变株有卡那霉素抗性；NAD依赖性试验证实突变株依赖NAD生长；PCR鉴定证实了卡那霉素抗性基因置换了apxIIC基因，并证实突变株中无pBSKA质粒的存在；溶血活性试验证实突变株完全失去了溶血活性；细胞毒性试验证实突
【机 构】
：
四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室,雅安 625014
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会教学专业委员会第六届第12次学术研讨会
论文部分内容阅读
重组转移载体pBSKA通过电转化导入亲本菌传染性胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌(APP-7)WF83株，电转化后的产物涂布于TSB/Kan平板，1-2d可获得突变株。卡那霉素抗性试验证实突变株有卡那霉素抗性；NAD依赖性试验证实突变株依赖NAD生长；PCR鉴定证实了卡那霉素抗性基因置换了apxIIC基因，并证实突变株中无pBSKA质粒的存在；溶血活性试验证实突变株完全失去了溶血活性；细胞毒性试验证实突变株的细胞毒性完全丧失；对小鼠的安全性试验证实突变株的毒力显著减弱，突变株对小鼠是安全的。遗传稳定性试验证实突变株在体外连续传30代或在体内传10代不会发生卡那霉素抗性的丢失。这表明我们所构建的基因缺失减毒株是成功的，为进一步以此突变株作为基因工程弱毒活疫苗株的研究奠定了一定的基础。
其他文献
定量检测肠炎沙门氏菌（SE）不同途径感染雏鸭后消化道内大肠杆菌属的动态变化规律。鸭源肠炎沙门氏菌（SE）经口服、滴鼻和皮下注射感染7日龄雏鸭后，运用TaqMan探针实时荧光定量PCR（FQ-PCR）对SE感染后30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、72h、6d、9d无菌采集的每1cm十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠各肠段内大肠杆菌属DNA拷贝数（以对数值表示）进行检测
定量检测肠炎沙门氏菌（SE）不同途径感染雏鸭后消化道内葡萄球菌属的动态变化规律。鸭源肠炎沙门氏菌（SE）经口服、滴鼻和皮下注射感染7日龄雏鸭后，运用TaqMan探针实时荧光定量PCR（FQ-PCR）对SE感染后30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、72h、6d、9d无菌采集的每1cm十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠各肠段内葡萄球菌属DNA拷贝数（以对数值表示）进行检测
以鸭源致病性肠炎沙门氏菌（SE）为抗原免疫兔制备兔抗SE高免血清，并以High-Q离子交换层析纯化获得兔抗SEIgG，建立了间接免疫荧光染色法（IFA）检测石蜡切片中SE的方法。并应用建立的方法对SE人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行检测，结果表明，在哈氏腺、心脏、肾脏、肝脏、脾、脑以及空肠、回肠、法氏囊中可以检测到SE抗原，并且抗原主要分布于感染细胞的细胞质。免疫荧光染色技术检测石蜡切片中
为探讨鸭瘟强毒感染诱导鸭局部黏膜和免疫器官中IgA细胞水平变化的规律，将雏鸭于皮下、口服和滴鼻感染DPV强毒后3、6、9、12、15、21天宰杀，应用间接免疫过氧化物酶组织化学染色法（IISM）对消化道、呼吸道和主要免疫器官中 IgA生成细胞和IgA进行定位检测。结果显示：DPV皮下感染鸭后，各组织器官中IgA生成细胞数量下降或变化不明显。口服和滴鼻感染鸭小肠黏膜固有层中IgA生成细胞数量于感染后
探讨鸭瘟弱毒苗在不同途径免疫鸭体内侵染、增殖和排泄规律，鸭病毒性肠炎病毒（DEV）弱毒Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后，应用TaqMan-MGB 探针实时荧光定量PCR（FQ-PCR）对实验鸭免疫后第10、30、60、90分钟、第12、24小时和第6、9、12、21、36、60天的心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、法氏囊、哈德氏腺、回盲处、血液、气管、气管分泌液、食管及其分泌液、十
将经纯化、复性的鸭瘟病毒UL6基因原核表达蛋白与等量弗氏佐剂混合制备重组蛋白疫苗，免疫7日龄雏鸭，并在免疫后3、5、7、10、14、21、28、35、42、49、56、70、84、98d分别血清检测ELIS A效价，并于免疫后21d以DPV-CHv强毒攻击其中一半雏鸭，根据攻毒后雏鸭发病率、死亡率及组织器官病变程度判断重组蛋白的免疫效果。结果显示：在免疫后28d重组蛋白ELISA抗体效价达到最高2
本研究分析比较了新发现的鸭病毒性肠炎病毒（Duck Enteritis Virus DEV) dUTPase基因（登录号DQ486149）和32 种参考疱疹病毒dUTPase 基因序列的密码子使用偏爱性。结果表明DEV dUTPase 基因编码蛋白长为477个氨基酸链，其中包括五个以3-1-2-4-5为排列顺序的保守基序。CAI，ENC，GC3S 值表明疱疹病毒dUTPase同义密码子的使用呈偏爱
本研究以含DHBV PreS 蛋白,成功建立了检测DHBsAg的免疫组化检测方法。采集感染DHBV后12天的肝脏、胰腺、肾脏、脾脏及大脑等组织,分别进行DHBsAg免疫组化定位研究。将所建立的免疫组化应用于检测拉米夫定治疗DHBV感染鸭后DHBsAg的分布，以评价拉米夫定治疗DHBV的效果。结果表明，DHBsAg 主要表达于肝细胞胞浆内,多呈弥漫性分布；在胰腺、肾脏、脾脏及大脑中也检测到阳性细胞分
根据鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus，DHBV)P基因上的保守序列设计并合成引物和荧光标记探针，建立了荧光定量聚合酶链反应(fluorsescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)检测方法。本实验建立的标准曲线循环阈值（Ct值）与模板浓度具有良好的线性关系，相关系数为0.996；将其检测极限的Ct值通过标准
通过建立用鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B virus，DHBV)感染模型研究新药PNA抗DHBV的作用。在用药前、用药5天、10天及停药后3天分别采血和肝组织,荧光定量PCR检测血清和肝组织中的DHBV-DNA并观察肝组织形态学变化。2个对照组分别给予拉米夫定、生理盐水。实验结果显示，PNA 给药5天、10天时血清和肝组织中DHBV-DNA总体水平显著下降（P0.05)。PNA