【摘 要】
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本文对本研究小组前期鉴定、表达出的鸭瘟病毒(Duck plague virus, DPV)胸苷激酶(Thymidine Kinase, TK)基因、TK重组蛋白展开了以下系列研究：DPV TK基因在鸭胚成纤维细胞(Duc
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本文对本研究小组前期鉴定、表达出的鸭瘟病毒(Duck plague virus, DPV)胸苷激酶(Thymidine Kinase, TK)基因、TK重组蛋白展开了以下系列研究：DPV TK基因在鸭胚成纤维细胞(Duck Embryo Fibroblast, DEF)中的转录与表达时相分析；TK重组蛋白作为包被抗原建立TK-ELISA检测DP抗体。结果如下：1.荧光定量PCR (FQ-PCR)与蛋白印迹(Western-blot)分析DPV TK基因的转录与表达时相。转录时相显示DPV TK基因最早在感染后30min开始转录,随后转录产物量迅速增加,并于感染后4h达到高峰,36h后其相对含量下降到一定水平,72h转录产物极少；表达时相显示感染后从6h开始大量表达,8h达到表达的高峰,随后持续下降直到48h。转录与表达时相共同证明TK基因具备疱疹病毒早期基因的典型特征。2.TK重组蛋白作为包被抗原建立TK-ELISA方法。结果表明,最佳包被抗原稀释倍数、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数分别为：2.5μg／100μl(1：200)、1：80及1：2000。通过用建立的TK-ELISA检测鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭疫里默氏菌(R.A)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭沙门氏菌(S. anatum)血清,并与鸭瘟病毒(DPV)血清对照,显示出TK-ELISA具有良好的特异性。对一份鸭阳性血清做梯度稀释,依照临界值(0.401),最大能检测出1：2560的稀释度。通过免疫活疫苗,用TK-ELISA检测发现在第4周抗体达最高峰。对30份疑似感染鸭瘟血清临床样本检测,阳性检出率为90%(27/30), TK-ELISA与血清中和试验(SNT)显示出83.33%的符合率,与全病毒包被的ELISA(DPV-ELISA)显示出90%的符合率。
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