有机磷农药是一类广谱高效杀虫剂,在农田和卫生害虫的防治上应用广泛。有机磷农药在农药使用的比重中占据了重要的地位,虽然有机磷农药容易降解,但由于过度使用,造成的食品、环境污染依旧很严重,对人们的身体健康造成危害。根据有机磷农药的结构,本文选取了含有双乙氧基结构的有机磷农药为待检的目标农药,建立了一种新型灵敏快速的化学发光免疫分析方法,用于环境、农产品中一类有机磷农药的多残留检测。合成了新型的发光标记物、半抗原,并对发光标记物进行纯度及发光性能测定,将磁性微粒引入免疫反应中,便于反应后的分离提取,在此基础上,初步建立了检测一类有机磷农药残留的非均相化学发光免疫分析方法,论证了利用单一半抗原来检测多残留的非均相化学发光免疫分析法的可行性。1.二乙氧基磷乙酸与ABEI通过酰胺反应得到发光标记物,该标记物既具有双乙氧基结构又具有鲁米诺的发光结构。采用硅胶柱层析法,湿法装柱,层析体系为乙酸乙酯：石油醚：三乙胺=2：5：0.1。采用湿法装柱的方式,每5ml收集一管,共收集60管,对每管进行薄层层析分析,得出第26-48管中分别含有目标产物,收集至旋蒸瓶中,减压浓缩旋干的产物。产物的一级质谱图(MS-IT-TO F)中分子离子峰455.2056与理论分子离子峰[M+H]+455.2054相符,其紫外吸收图谱具有260rnm与280nm处的酰胺键的吸收峰,ABEI相比紫外吸收峰有明显蓝移。2.发光标记物具有良好的发光特性,在浓度10-160mg/L之间表现出良好的线性关系,标准曲线方程为y=268.263x+5837.667,相关系数R2为0.998,在浓度为20mg/L时,发光强度已达到11000以上,有较强的发光能力。在紫外分析仪中透射光300nm和反射光365nm下也表现出良好的发光特性。在动力学试验中,从反应开始到最大发光值只需4S,之后迅速下降,到45S时趋于平缓,属于快反应,在初步的竞争性免疫反应分析试验中,加入毒死蜱后发光强度较未加入毒死蜱的发光强度有显著下降,符合化学发光免疫分析的条件,表明该标记物能够用于后续对有机磷农药进行快速化学发光免疫分析检测。3.四种磁性微粒与抗二乙氧基抗体的偶联进行对比试验结果表明氨基与羧基末端磁性微粒偶联率均为为33%左右,而异硫氰根末端磁性微粒与抗体的偶联率达到40%,金磁微粒与抗体的偶联率达到53.7%。偶联物的稳定性实验结果表明四种磁粒抗体偶联物在室温下保存的分解率比4℃下要大很多。室温保存的偶联物分解率在60d几乎都大于70%。而在4℃下,金磁微粒-抗体的偶联物的稳定性要好于其他三种,且在30内分解率低于10%,其他三种在20d内的稳定性良好,但随着时间的延长,分解率变大；在60d时,四种磁粒的分解率都超过25%。4.试验条件通过单因素试验进行优化,在最佳反应条件下,分别对毒死蜱、三唑磷和辛硫磷三种含二乙氧基结构的有机磷农药进行化学发光免疫分析法标准曲线的绘制,毒死蜱在10～320ng/mL之间表现出良好的线性,相关系数0.99496,检出限为3.6ng/mL,线性方程为Y=14488.363-34.486X,三唑磷在5-320ng/mL之间表现出良好的线性,相关系数0.99596,检出限为2.1ng/mL,线性方程为Y=17960.477-41.191X,辛硫磷在10～320ng/mL之间表现出良好的线性,相关系数0.99159,检出限为5.4ng/mL,线性方程为Y=16468.860-39.354X,三种农药的相对标准偏差均在8%以内。交叉反应率试验结果表明具有双乙氧基结构的农药的交叉反应率在90%以上,而具有类似结构的双甲氧基结构的农药的交叉反应率在10%以下,其他结构的农药无交叉反应,说明CLIA对于双乙氧基结构的农药具有良好的选择性,具有很高的特异性。不同样品的基质在稀释2倍之后,基质对于CLIA发光强度的影响作用几乎没有,继续稀释4倍或8倍情况下,与稀释2倍结果基本-致。在空白加标回收率中,选择的低中高浓度分别为20ng/mL、100ng/mL和300ng/mL,结果表明三种浓度的空白加标回收率分别为106.6%、99.8%和100.9%,且相对标准偏差在5%以内,说明CLIA具有良好的精密度及回收率。实验结果表明,本文建立的检测具有双乙氧基结构的有机磷农药的多残留非均相化学发光免疫分析方法是可行的。