目前还未见DPV UL17基因功能研究的报道,本论文对DPV-CHv株的UL17基因(由本实验室注册,GenBank登录号EF643567)进行了生物信息学分析,根据分析结果设计实验,对UL17基因进行原核表达、多克隆抗体制备、转录表达时相分析及UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位研究,结果如下：1. DPV-UL17基因的生物信息学分析生物信息学方法分析DPV-UL17基因,结果表明UL17基因编码蛋白分子量为75.94298 kDa,由684个氨基酸组成,无信号肽位点及跨膜区。同时该蛋白含19个磷酸化位点、4个糖基化位点和多个抗原表位,预测其主要定位在细胞核和细胞质。2. DPV-UL17基因克隆表达、蛋白纯化和多克隆抗体制备根据DPV UL17基因序列,用Primer Premier 5.0软件设计出一对特异性引物,并将扩增的UL17全基因克隆入pMD20-T载体中,先后经Xhol和BamHI酶切后,克隆到原核表达质粒pET-32a (+)中,成功构建了pET32a-UL17重组原核表达质粒。之后转化到BL21(DE3)表达宿主菌,表达的重组蛋白大小约为96kDa。使用Ni-NTA琼脂糖凝胶过柱纯化,将纯化后的重组蛋白免疫BALB/C雄性小鼠和雄性家兔,制备鼠抗重组蛋白高免血清和兔抗重组蛋白高免血清,最高效价分别为1：4和1：32。3. DPV UL17基因转录和表达时相分析根据DPV UL17基因序列,在其内部设计了一对FQ-PCR的引物用于转录时相分析。药物抑制实验结果显示,UL17基因为晚期基因。进一步用荧光定量PCR研究其转录时相,UL17基因从12h开始转录,48h达到最大,72h开始急剧下降。通过Western Blotting研究表达时相,最早于36h检测到UL17蛋白。综合三个实验的结果说明UL17基因为晚期基因。4. DPV UL17基因编码蛋白亚细胞定位采用间接荧光免疫法检测ULl 7蛋白在DPV感染的鸭胚成纤维细胞内的定位情况。结果显示,UL17蛋白刚开始定位在细胞质,然后逐渐进入细胞核,同时随着表达量增大荧光亮度也在增大。说明UL17蛋白定位在细胞质及细胞核。且无论在细胞核还是细胞质可见绿色荧光为颗粒状或点状。5. DPV UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白亚细胞共定位研究采用双重间接荧光免疫法检测UL17蛋白与UL25蛋白,UL17蛋白与UL26.5蛋白在DPV感染的鸭胚成纤维细胞内是否共定位。结果显示,UL17蛋白与UL25蛋白共定位于细胞核和细胞质；UL17蛋白与UL26.5蛋白也共定位于细胞核和细胞质。