蚓激酶(Lumbrokinase，LK)是从蚯蚓体内提取的一种具有纤溶活性的蛋白水解酶，它能直接降解血中纤维蛋白原及激活纤溶酶原为纤溶酶。蚓激酶能降低血液粘稠度、溶栓、减少血小板聚集、改善微循环，具有良好的体内外溶栓抗凝作用。作为溶栓药物，蚓激酶先后在韩国和中国上市，在心脑血管疾病治疗中显示出明显的疗效。 毕赤酵母是目前应用最为广泛和成功的外源蛋白表达系统，其培养条件简单易行、容易形成大规模生产；表达产物经过二硫键形成、正确折叠、糖基化及信号处理等修饰，使其特性接近天然产物。鉴于上述原因，毕赤酵母表达系统成为开发蛋白类基因工程药物的首选。 本实验目的是获得能够表达蚓激酶的基因工程酵母菌株。通过PCR扩增目的基因，将其连接到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K，得到目的基因表达载体。载体经线性化后，电击转入毕赤酵母GS115中，经过组氨酸营养缺陷平板筛选及G418筛选，得到一系列转化子。经PCR验证，目的基因已经转入酵母体内。Northern dot blotting检测目的基因已在酵母体内转录。将得到的转化子在甲醇营养限制平板筛选，得到的转化子鉴定为甲醇利用缓慢型Muts。经诱导后的发酵液可以溶解血纤维蛋白平板。 本实验为基因工程生产蚓激酶的中上游工作提供良好的理论支持，为下一步大规模发酵打下基础。