薯蓣皂苷元对糖尿病周围神经病变N2a细胞凋亡影响的研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sakula617
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目的:本研究用高糖+脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)培养N2a细胞建立糖尿病周围神经病变的细胞模型[1-3],采用噻唑蓝MTT检测方法,观察不同浓度穿山龙提取物薯蓣皂苷元对高糖+LPS培养的N2a细胞存活率的影响,以明确后续药物的最佳治疗浓度;采用Tunel、Western-blot检测方法,观察穿山龙提取物薯蓣皂苷元对高糖+LPS培养N2a细胞的凋亡影响及其调控因子Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3表达的影响。材料与方法:1.将N2a细胞分成正常对照组、高糖+LPS模型组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元5μg/ml治疗组,高糖+LPS+薯蓣皂苷元10μg/ml治疗组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元20μg/ml治疗组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元40μg/ml治疗组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元80μg/ml治疗组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元160μg/ml治疗组、高糖+LPS+薯蓣皂苷元320μg/ml治疗组。正常对照组:在培养瓶中加入正常培养液,隔天换液。高葡萄糖+LPS模型组:加入30mM葡萄糖和1μg/ml LPS处理24小时后,加入正常培养液。高葡萄糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组:30mM葡萄糖和1μg/ml LPS处理24小时后,加入薯蓣皂苷元得到不同浓度(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)的培养液,继续培养24小时。通过MTT方法检测各组N2a细胞的存活率,以明确后续药物的最佳治疗浓度。2.将N2a细胞分为三组:正常对照组、高葡萄糖+LPS模型组、高葡萄糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组。正常对照组:在培养瓶中加入正常培养液,隔天换液。高葡萄糖+LPS模型组:加入30mM葡萄糖和1μg/ml LPS处理24小时后,加入正常培养液。高葡萄糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组:30mM葡萄糖和1μg/ml LPS处理24小时后,加入MTT确定的最佳治疗浓度的薯蓣皂苷元,继续培养24小时。通过Western blot方法检测各组N2a细胞的凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3。Tunel法检测各组N2a细胞的细胞凋亡率。结果:1.在各实验组中,与高糖+LPS模型组相比较,薯蓣皂苷元不同浓度干预的N2a细胞的存活率从高到底依次为:高糖+LPS+薯蓣皂苷元40μg/ml实验治疗组(P<0.001)、高糖+LPS+薯蓣皂苷元80μg/ml实验治疗组(P<0.01)、高糖+LPS+薯蓣皂苷元160μg/ml实验治疗组(P<0.05)、高糖+LPS+薯蓣皂苷元20μg/m实验治疗组(P<0.05)。2.与正常对照组相比较,高糖+LPS模型组Cleaved Caspase-3的表达明显升高(P<0.001),高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Cleaved Caspase-3的表达有所升高(P<0.01)。与高糖+LPS模型组相比较,高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Cleaved Caspase-3的表达下降(P<0.01)。3.与正常对照组相比较,高糖+LPS模型组Bcl-2的表达明显下降(P<0.001),高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Bcl-2的表达有所下降(P<0.05)。与高糖+LPS模型组相比较,高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Bcl-2的表达升高(P<0.001)。与正常对照组相比较,高糖+LPS模型组Bax的表达明显升高(P<0.001),高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Bax的表达有所升高(P<0.01)。与高糖+LPS模型组相比较,高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组Bax的表达下降(P<0.05)。4.正常对照组可见散在零星的凋亡细胞。与高糖+LPS模型组相比较,正常对照组凋亡细胞数明显少于高糖+LPS模型组。与高糖+LPS模型组相比较,高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组凋亡细胞数少于高糖+LPS模型组。与正常对照组相比较,高糖+LPS模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组细胞凋亡率有所升高(P<0.01)。与高糖+LPS模型组相比较,高糖+LPS+薯蓣皂苷元治疗组细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:穿山龙提取物薯蓣皂苷元通过下调高糖+LPS损伤的N2a细胞的促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达,上调其抗凋亡蛋白Bcl-2表达,发挥抑制N2a细胞凋亡的作用。
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