尿酸盐刺激下痛风ELOVL6及相关NLRP3炎症体的表达及意义

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目的:探讨在痛风性关节炎(GA)中,尿酸盐刺激下超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)与NLRP3炎症体在炎症反应中的表达及临床意义。方法:(1)33例GA患者根据临床表现分为GA急性期(AGA15例),GA非急性期(NAGA组18例)以及健康对照组(HC组20例)的外周静脉肝素抗凝血,分成2ml/管,并分离血浆,提取单个核细胞后分为MSU(100μg/ml)刺激和未刺激组,放置于含5%CO2的37℃细胞培养箱中孵育0h、12h、24h,收集单个核细胞。采用实时荧光定量多聚合酶链反应(RT-q PCR)检测AGA、NAGA组和HC组PBMCs中ELOVL6、NLRP3、Caspase-1、IL-1β基因m RNA的表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液上清中IL-1β表达水平。此外,收集研究对象一般临床资料和实验室资料进行单因素分析、Pearson相关分析。(2)通过合成尿酸钠结晶(MSU)分析其对人外周血单核细胞系THP-1的促炎作用,分别以0、25、50、100和200μg/ml的MSU晶体刺激THP-1细胞0 h、12h、24h,检测不同时间、不同浓度的MSU晶体对ELOVL6和炎症体组分Nod样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶(Caspase-1)及促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)m RNA表达的影响;Western Blot检测MSU刺激THP-1细胞后ELOVL6、NLRP3、Caspase-1蛋白水平的表达。(3)采用SPSS Statistics17.0统计软件进行分析,作图采用Graph Pad Prism7.0软件。结果:(1)MSU晶体刺激PBMCs 0h、12h、24h后发现,ELOVL6m RNA表达水平在尿酸盐刺激12h NAGA组达到高峰,较刺激12h AGA组表达高(P<0.05),差异有统计学意义。(2)ELOVL6m RNA表达水平在刺激12h、24h后NAGA组均较刺激12h、24h后HC组高,在AGA、NAGA组刺激12h、24h后表达水平均高于未刺激组(P<0.05),差异有统计学意义。(3)NLRP3m RNA表达水平在MSU刺激AGA组、NAGA组12h、24h后均较未刺激AGA、NAGA组低,在未刺激AGA、NAGA组24h均较未刺激HC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)PBMCs细胞上清液IL-1β的含量在AGA组刺激24h达到高峰,较NAGA刺激24h组明显升高(P<0.05),差异有统计学意义。(5)THP-1在经200μg/ml MSU晶体刺激24h后ELOVL6、IL-1βm RNA和培养液上清IL-1β、IL-18表达水平显著增加,NLRP3、Caspase-1m RNA在经200μg/ml MSU晶体刺激12h后表达相对较高(P<0.05),差异有统计学意义。(6)THP-1在MSU浓度为200μg/ml刺激12h、24h后,ELOVL6蛋白表达水平显著增加,且在200μg/ml刺激24h表达水平达到峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)本研究发现,ELOVL6在尿酸盐刺激痛风患者PBMC及THP-1细胞中过表达,NLRP3基因和蛋白水平表达降低,Caspase-1基因和蛋白水平升高,证实ELOVL6在高尿酸环境中表达上升,NLRP3负向表达。(2)通过本课题我们发现ELOVL6可以被MSU晶体识别,其表达量随MSU刺激的改变而变化,并且呈现浓度时间依赖。MSU晶体激活NLRP3炎症体后,ELOVL6可能通过负向调控NLRP3达到调控整个NLRP3炎症信号通路的作用,从而参与痛风的炎症反应过程,更有可能在非急性期痛风患者中起作用。
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