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牙周治疗的理想目标就在于诱导牙周组织再生。新生牙槽骨是重建牙周新附着的基础，没有新生的牙槽骨，牙周纤维组织就没有附着的锚地。骨形成蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)属于转化生长因子β超家族成员，能在非骨组织如肌肉中诱导新骨形成，因而在骨生长和骨缺损治疗中极为重要。已有大量动物实验研究结果表明：局部运用外源性重组BMP可以诱导牙周损伤区域牙槽骨、牙骨质、牙周纤维组织的新生。但是，牙周组织的特点决定了局部应用外源性BMP既很难达到所要求的浓度，又极易被体液稀释流失，而且在一定程度上还有促进细菌繁殖的可能。为了克服外源性生长因子半衰期短、生物活性低、易降解的缺点，现多将基因工程与牙周组织工程相结合，通过转基因手段诱导表达分泌型生长因子，在局部造成生长因子适当表达并持续一段时间，为利用生长因子诱导牙周组织再生开拓了新的前景。本研究拟将人骨形成蛋白2真核表达载体pcDNA3.1-B2转染入小鼠成纤维细胞系细胞(NIH3T3细胞)，建立能稳定表达BMP2的细胞系，并利用细胞共培养系统Transwell，观察转基因诱导表达的分泌型BMP2对NIH3T3细胞骨化分化的影响。以探讨BMP2基因治疗在牙周组织工程方面的意义。 实验一 pcDNA3.1-B2真核表达质粒的鉴定及稳定表达BMP2细胞系的建立 目的 通过转基因技术，建立稳定表达BMP2的成纤维细胞系。 材料和方法 将pcDNA3.1-B2用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后，经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，并检测其携带目的基因的核酸序列。将经过鉴定的pcDNA3.1-B2真核表达质粒通过高效的阳离子聚合物转染试剂转染入NIH3T3细胞中，并用G418筛选获得稳定转染细胞株。RT-PCR和酶联免